《以PDE2为靶标的抑制剂药物高通量筛选模型的建立》

技术简介：

目的:建立稳定可靠,且以二型磷酸二酯酶(PDE2)为靶标,采用AlphaScreencAMP kit为技术的高通量药物筛选模型。方法:利用大肠杆菌原核表达纯化获得目的蛋白,通过AlphaScreen酶活体系摸索MgCl2浓度对PDE2活性影响,测定底物Bio-cAMP的Km值,考察二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)对体系的影响,最后测定阳性抑制剂Bay 60-7550的半抑制浓度(IC50)验证模型。结果:纯化的PDE2蛋白通过SDS-PAGE检测分子量约为40. 0 kD,测得浓度1. 2 mg·m L-1;反应缓冲液中MgCl2浓度定为10 mmol·L-1,结合米氏方程,测得Km后确定底物工作浓度为200 nmol·L-1,PDE2工作浓度为0. 12 mg·m L-1;体系DMSO含量需低于4%;通过以上条件测得Bay 60-7550的IC50值为8. 4 nmol·L-1,与文献值近似。结论:建立的高通量筛选模型,具备易于操作、信号窗口大、速度快、节省原料等特点,可用于PDE2抑制剂筛选。

研发人员：许煌;许晓双;高英;曹依菁;黄险峰;孔韧;宋国强;